信息来源：互联网   发布时间：2023-09-03

检测依据：GBT5750.2-2023《生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存》GBT5750.12-20

 

检测依据：GBT5750.2-2023《生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存》GBT5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》本文主要包含1.生活饮用水中的微生物指标2.水样采集规则及注意事项

3.菌落总数、总大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定方法4.对所检测水样的综合分析生活饮用水中的微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或

CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数MPN/100mL或CFU/100mL100一般性污染

菌落总数lmL水样在营养琼脂培养基上,在有氧条件下36℃士l℃培养48h后,所得lml水样中的菌落总数.检测意义:作为一般性污染的指标,即评价被检样品的微生物污染程度和安全性水样菌落总数越多,说明水被微生物污染程度越严重,病原微生物存在的可能性越大,但不能说明污染的来源。

总大肠菌群指一群在36℃士1℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌检测意义:作为粪便污染的指标水样总大肠菌群的含量,表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。

微生物指标常规检验流程图

一、水样采集采样原则：所采集的样品具有代表性采样容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运送、贮存过程中不受污染。

自来水水样:先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌再开放水龙头使水流5min(经常用水的水龙头放水1~3min)后,采集水样于无菌玻璃瓶,约占瓶容量80%,以便摇匀水样水源水水样:选有代表性的地点及可疑地方,一般距水面下10-15cm采集，采样后在水中改好盖子，再从水中取出。

注意事项1.严格无菌操作2.做好标记:采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等内容3.从速送检水样从采集到检验不应超过2h,在0~4℃下保存不应超过24h二、菌落总数测定-平皿计数法所需培养基和试剂：营养琼脂、9ml无菌生理盐水管。

自来水水样检测操作步骤：1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中2.倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水与培养基充分混匀（每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照）。

3.待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培养箱内培养48h±2h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数4.培养完成后，用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏实验数据处理:若菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面零的个数也可用10的指数来表示(见表1)。

国家标准(GB5749-2022)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个水源水检测操作步骤：1.以无操作方法吸取1mL充分混匀的水,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液2.吸取1:10的稀释液1ml，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀师液,按同法依次稀释成1:1000,1:1000释液等备用（如此递增稀释一次,必须更换一支1m灭菌管）。

3.然后用无菌极管取稀释的水样和2个~3个适释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。

试验数据处理:计算平均菌落数，首先选择平均菌落在30~300之间者进行计算。计算方法和报告方式：

一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系：水的类别最清洁水清洁水不太清洁水不清洁水极不清洁水菌落总数CFU/100mL10-100100-10001000-1000010000-100000>100000

注意事项1.菌落总数测定中,应选择合适的稀释度进行(生活饮用水,国家标准规定每毫升不得超过100个,因此以直接吸取1毫升到平板进行培养)2.各稀释管、相应半皿做好标记包括:水样名称、稀释度、时间、小组3.严格无菌操作进行水样稀释时,每一稀释度均需更换吸管。

4.倾注时,要注意营养琼脂的温度5.倾入琼脂后要混匀,待琼脂凝固后倒置培养三、总大肠菌群测定所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基多管发酵法步骤:初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养18-24h观察产酸产气情况。

平板分离:将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36 ℃士1℃培养箱内培养18 h~24 h,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染色镜检:--深紫黑色.具有金属光泽的菌落﹔--紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落﹔

--淡紫红色、中心较深的菌落复发酵证实试验:经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,同时接种乳糖蛋白豚培养液,置36 ℃士1℃培养箱中培养24h士2h,有产酸产气者,即证实有总大肠菌群存在结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2022 所附检索表报告结果。

初发酵、复发酵试验结果

大肠菌群在EMB平板上的典型特征

大肠菌群革兰氏染色镜检结果

四、耐热大肠菌群测定所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基多管发酵法步骤:初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况耐热培养:阳性管接种在EC肉汤管中，44.5℃培养24h观察产酸产气情况。

平板培养:阳性管接种在EMB平板上，36℃±1℃培养24h。结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。

不同细菌在EC肉汤中的生长特征

五、大肠埃希氏菌测定所需培养基和试剂：EC-MUG培养基多管发酵法步骤:耐热培养:将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测，接种此类试管中的液体到EC-MUG管中，在培养箱或恒温水浴中44.5℃培养24h。

如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴液面超过EC-MUG管的液面结果报告(MPN):将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水样中含有大肠埃希氏菌计算EC-MUG阳性管数，根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。

不同细菌在EC-MUG管中的生长特征

生活饮用水中微生物检测方法总结

来源：食品微生物检测

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